ارزیابی برخی صفات محرک رشد گیاهی باکتری‌های اندوفیت جداسازی شده از ساقه و برگ تعدادی از گیاهان دارویی

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان

دانشیار گروه علوم و مهندسی خاک، دانشکده کشاورزی و منابع طبیعی دانشگاه محقق اردبیلی

چکیده

گیاهان دارویی نقش حیاتی در پیشبرد اهداف ملی، منطقه­ای و جهانی برای تحقق سلامت، خودکفایی دارویی، ایجاد اشتغال و توسعه اقتصادی دارند. از آنجا که رویکرد جهانی در تولید گیاهان دارویی به سمت بهبود کمیت و کیفیت ماده مؤثره می­باشد، به نظر می­رسد که تغذیه­ی سالم این گیاهان از طریق کاربرد کودهای میکروبی دارای بیشترین تطابق با هدف تولید گیاهان دارویی می­باشد. لذا این تحقیق با هدف جداسازی باکتری­های اندوفیت از ساقه و برگ گیاهان دارویی و ارزیابی صفات محرک رشد گیاهی آنها به­منظور بررسی پتانسیل استفاده از این ریزجانداران به­عنوان کودزیستی انجام شد. به­منظور انجام این پژوهش، بوته­های سالم گیاهان دارویی ریحان، پونه، رزماری و مرزه از مزارع و گلخانه­های اطراف شهر اردبیل جمع­آوری و به آزمایشگاه منتقل شد. عمل جداسازی باکتری­های اندوفیت از ساقه و برگ گیاهان با تهیه سری­های رقت روی محیط کشت آگار مغذی حاوی قارچ­کش انجام شد. کلنی­های رشد یافته­ی متمایز از نظر شکل ظاهری کلنی، رنگ و حاشیه آن و همچنین سرعت رشد باکتری، پس از واکشت و خالص­سازی، در یخچال با دمای چهار درجه سلسیوس نگه­داری گردیدند. در مرحله­ی بعد تولید ایندول استیک اسید، قدرت حل­کنندگی تری کلسیم فسفات، pH محیط کشت، تولید سیانید هیدروژن و پروتئاز در جدایه­ها اندازه­گیری گردید. در این پژوهش در مجموع 95 باکتری اندوفیت از گیاهان مذکور جداسازی و پس از بررسی صفات مرفولوژیک مذکور و سرعت رشد آنها در نهایت 52 جدایه (از هر گیاه 13 جدایه) متفاوت انتخاب شد. نتایج حاصل نشان داد که تمامی باکتری­های اندوفیت مورد مطالعه قادر به تولید ایندول استیک اسید در غلظت 100 میلی گرم در لیتر ال- تریپتوفان بودند. توانمندترین باکتری­ها از نظر تولید IAA در پونه (جدایه­های p 4، p 3 با تولید به­ترتیب 3/15 میلی­گرم در لیتر، 6/11 میلی­گرم در لیتر ایندول استیک اسید) و ریحان (جدایه B1 با تولید 0/13 میلی­گرم در لیتر ایندول استیک اسید) مشاهده شد. همه جدایه­های این تحقیق توانایی انحلال تری کلسیم فسفات را داشتند. قوی­ترین جدایه­ی حل­کننده فسفر ( S5با میزان انحلال 646 میلی‌گرم در لیتر) در بین باکتری­های جداسازی شده از گیاه مرزه مشاهده شد. کمترین مقدار توان حل­کنندگی فسفر، در باکتری­های جداسازی شده از رزماری (جدایه  R4با میزان انحلال 100 میلی‌گرم در لیتر) مشاهده شد. در پژوهش حاضر همه ریزجانداران مورد ارزیابی قادر به تولید سیانید هیدروژن از مقدار کم تا خیلی زیاد بودند. در ارزیابی توانایی تولید آنزیم پروتئاز در باکتری­های اندوفیت جداسازی شده، تشکیل هاله شفاف تنها در اطراف کلنی باکتری­های S1، S4، B9، B12، B3، B11، R7، p 6 و p 4 مشاهده شد. با توجه به نتایج، پیشنهاد می­گردد اثرات جدایه­های برتر بر میزان رشد و عملکرد گیاهان دارویی مورد استفاده در این پژوهش در شرایط گلخانه و مزرعه بررسی گردد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات

عنوان مقاله [English]

Evaluation of plant growth promotion characteristics of endophytic bacteria isolated from leaves and stems of some medicinal plants

نویسندگان [English]

  • A. A. Soltani Toularoud
  • Esmaeil Goli
Associate Professor, Department of Soil Science and Engineering, Faculty of Agriculture and Natural Resources, University of Mohaghegh Ardabili
چکیده [English]

Medicinal plants have an important role in advancing national, regional and global goals for achieving health, drug self-sufficiency, employment creation and economic development. Since, quality and quantity improving of medicinal plants is aimed therefore it seems that the application of biofertilizers is the most compatible with that purpose. The objectives of this research were to isolate endophytic bacteria from leaves and stems of medicinal plants and to evaluate their growth promoting traits and assess their potential as biofertilizers. Healthy basil, rosemary, savory and pennyroyal plants were collected from area around Ardabil city and transferred to the laboratory. The endophytic bacteria isolated using serial dilution technique on the nutrient agar. Different colonies according to the appearance, color, margin and growth rate were selected, purified and kept at 4 °C. Then, the ability of the isolates to produce Indole Acetic Acid (IAA), solubilization of tricalcium phosphate, hydrogen cyanide and protease were evaluated. In this study, 99 endophytic bacteria were isolated from the medicinal plants. Finally, According to the morphological properties and growth rate, 53 different isolates (13 isolates from each plant) were selected. Results revealed that all the endophytic bacteria were able to produce IAA at 100 mg l-1 L-tryptophan. The most potent bacteria in terms of IAA production were p < sub>4, p < sub>3 and B1 isolates (with production of 15.31 mg l-1, 11.55 mg l-1 and 12.97 mg l-1, respectively). All of the examined isolates had the ability to dissolve tricalcium phosphate. The highest ability of solubility (646.52 mg l-1) was observed in S5 isolated from Savory. The bacteria isolated from Rosemary had the lowest ability to dissolve tricalcium phosphate. All bacterial isolates were able to produce hydrogen cyanide. In assessing the ability of isolated endophytic bacteria to produce protease enzyme, clear zone formation was observed only around the colonies of S1, S4, B9, B12, B3, B11, R7, p < sub>6 and p < sub>4. It is suggested that the effects of superior isolates on growth and yield of medicinal plants used in this study should be investigated in greenhouse and field conditions before any recommendation.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Indole acetic acid
  • Phosphorus
  • Hydrogen cyanide
  • Protease
  • Biofertilizer

مراجع

  1. خسروی پور، ب.، سیاهپوش، ع.ب.، مهمدی کربلایی، ز. ۱۳۹۴. اهمیت کشت گیاهان دارویی و تولید فرآورده­های آن در کشاورزی،اولین همایش گیاهان دارویی و داروهای گیاهی، تهران، مرکز توسعه پایدار علم و صنعت فرزین.
  2. Altomare, C., Norvell, W.A., Borjkman. T. and Harman, G.E. 1999. Solubilization of phosphates and micronutrients by the plant growth promoting and biocontrol fungus Trichoderma harzianum Rifai 1295–22. Applied and Environmental Microbiology. 65:2926–2933.
  3. Aravind, R., Antony, D., Eapen, S. J., Kumar, A. and Ramana, K.V. 2009. Isolation and Evaluation of Endophytic Bacteria Against Plant Parasitic Nematodes Infesting Black Pepper (Piper nigrum). Indian Journal of Nematology. 39 (2): 211-217.
  4. Bacon, C.W. and White, J.F. Microbial Endophytes; Marcel Dekker Inc.: New York, NY, USA, 2000.
  5. Banik, S. 1983. Variation in potentiality of phosphate solubilizingsoil microorganisms with phosphate and energy source. Zentralblatt für Mikrobiologie. 138: 209-216.
  6. Barka, E.A., Gognies, S., Nowak, J., Audran, J.C. and Belarbi, A. 2002. Inhibitory effect of endophyte bacteria on Botrytis cinerea and its influence to promote the grapevine growth. Biological Control. 24: 135-142.
  7. Bent, E., Tvzun, S., Chanway, C.P. and Enebak, S. 2001. Alterations in plant growth and root hormone levels of lodge pole pines inoculated with rhizobacteria. Canadian Journal of Microbiology. 47: 793-800.
  8. Cho, K.M., Hong, S.Y. and Lee, S.M. 2007. Endophytic bacterial communities in Ginseng and their antifungal activity against pathogens. Microbial Ecology. 54: 341-351.
  9. Donate-Correa, J., Leon-Barrios, M. and Perez, G. 2004. Screening for plant growth-promoting rhizobacteria in Chamaecytisus proligerus, a forage tree- shrub legume endemic to the Canary Island. Plant and Soil. 226: 967-978.
  10. Garrity, G.M., Brenner, D.J., Krieg, N.R., Staley, J.T., editors. Bergey's manual of systematic bacteriology. 2nd New York: Spriger; 2005. P . 323-84.
  11. Goldstein, A. H. 1986. Bacterial solubilization of mineral phosphates: historical perspectives and future prospects. American Journal of Alternative Agriculture. 1:57–65.
  12. Hung, P.Q. and Annapurna, K. 2004. Isolation and Characterization of Endophytic Bacteria in Soybean (Glycine sp.). Omonrice, 12 (4): 92-101.
  13. Hung, P.Q., Kumar, S.M., Govindsamy, V. and Annapurna, K. 2007. Isolation and characterization of endophytic bacteria from wild and cultivated soybean varieties. Biology and Fertility of Soils. 44: 155–162.
  14. Iniguez, A.L., Dong, Y. and Triplet, E.W. 2004. Nitrogen fixation in wheat provided by Klebsiella pneumonia Molecular Plant-Microbe Interactions. 17: 1078-1085.
  15. Jha, P.N. and Kumar A. October 2007. Endophytic colonization of Typha australis by a plant growth-promoting bacterium Klebsiella oxytoca strain GR-3. Journal of Applied Microbiology. 103(4): 1311–1320.
  16. Kapoor, R., Giri, B. and Mukerji, K.J. 2002. Mycorrhization of coriander (Coriandrum sativum) to enhance the concentration and quality of essential oil. Journal of the Science of Food and Agriculture. 82 (4): 339- 342
  17. Lata, R., Chowdhury, S., Gond, S.K. and White. J.r. J.F. 2018. Induction of abiotic stress tolerance in plants by endophytic microbes. Letters in Applied Microbiology. 66 (4): 268-276.
  18. Lee, S., Flores-Encarnacion, M., Contreras-Zentella, M., GarciaFlores, L., Escamilla, J.E. and Kennedy, C. 2004. Indole-3-acetic acid biosynthesis is deficient in Gluconacetobacter diazotrophicus strains with mutations in cytochrome C biogenesis genes. Journal of Bacteriology. 186: 5384–5391.
  19. Long, H.H., Schmidt, D.D. and Baldwin I.T. 2008. Native bacterial endophytes promote host growth in a species-specific manner; phytohormone manipulations do not result incommon growth responses. Plos One. 3: e2702.
  20. E., Vassilev, N. 2014. A contribution to set a legal framework for biofertilisers. Applied Microbiology and Biotechnology. 98 (15): 6599–6607.
  21. Maurhofer, M., Keel, C., Haas, D. and Defago, G. 1995. Influence of plant species on disease suppression by Pseudomonas fluorescens Strain CHA0 with enhanced antibiotic Plant Pathology. 44: 40-50.
  22. Mazid, M., Khan, T.A. 2015. Future of bio-fertilizers in Indian agriculture: an overview. International Journal of Agricultural and Food Research. 3 (3):10–23.
  23. Nair, D.N. and Padmavathy, S. 2014. Impact of Endophytic Microorganisms on Plants, Environment and Humans. The Scientific World Journal. Volume 2014, Article ID 250693, 11 pages.
  24. Patel, H.A., Patel, R.K., Khristi, S.M., Parikh, K. and Rajendran, G. 2012. Isolation and  Characterization  of  Bacterial  Endophytes  From  Lycopersicon  esculentum   Plant  and  Their  Plant  Growth  Promoting  Characteristics. Nepal Journal of Biotechnology. 2(1): 37-52.
  25. Raja, D., Sivasankari, B. and Daniel, T. 2008. Bioefficacy of Methylobacterium spp. Isolated from various leaf samples on the growth performance of black gram, (L.) Vigna mungo L. walp. Current science. 12: 735-740.
  26. Rodriguez, H.; Gonzalez, T. and Selman, G. 2000. Expression of a mineral phosphate solubilizing gene from Erwinia herbicola in two rhizobacterial strains. Journal of Biotechnology. 84: 155-161.
  27. Ryu, C.M., Farag M.A., Hu, C.H., Reddy, M.S., Wei, H.X., Pare, P.W. and Kloepper, J.W. 2003a. Bacterial volatiles promote growth in Arabidopsis. Proceedings of the National Academy of Sciences. 100: 4927-4932.
  28. Seo, J.H., Leem, J.H., Ha, E.H., Kim, O.J. and Kim, B.M. 2010. Population-attributable risk of low birthweight related to PM10 pollution in seven Korean cities. Paediatric and Perinatal Epidemiology. 24 (2):140–148.
  29. Sessitsch, A., Reiter, B., Pfeifer, U. and Wilhelm, E. 2002. Cultivation-independent population analysis of bacterial endophytes in three potato varieties based on eubacterial and Actinomycetes-specific PCR of 16S rRNA genes. FEMS Microbiology Ecology. 39: 23-32.
  30. Sharma, S. B., Sayyed, R. Z., Trivedi, M. H. and Gobi, T. A. 2013. Phosphate solubilizing microbes: sustainable approach for managing phosphorus deficiency in agricultural soils. SpringerPlus. 2: 1-14.
  31. Shimanuki, H. and Vandenberg, J.D. 1987. Technique for rearing worker honeybees in the laboratoryJournal of Apicultural Research. 26 (2):90–97.
  32. Son, H.J.; Park, G.T.; Cha, M.S. and Heo, M.S. 2006. Solubilization of insoluble inorganic phosphate by a novel salt- and pH-tolerant Pantoea agglomerans R-42 isolated from soybean rhizosphere. Bioresource Technology. 97: 204-210.
  33. Spaepen, S., Vanderleyden, J. and Remans, R. 2007. Indole-3-acetic acid in microbial and microorganism plant signaling. FEMS Microbiology Reviews. 31: 425–448.
  34. Sperber, J. I. 1958. The incidence of apatite solubilizing organisms in the rhizosphere. Australian Journal of Agricultural Research. 9: 778-781.
  35. Sturz, A.V., Christie, B.R. and Nowak, J. 2000. Bacterial endophytes: potential role in developing sustainable systems of crop production. CRC Crit. Critical Reviews in Plant Sciences. 19: 1–30.
  36. SubbaRao, N.S. 1982. Advances in agricultural microbiology. Oxford and IBH Publications Company, India. pp: 229–305.
  37. Surette, M. A., Sturz, A. V., Lada, R. R. and Nowak, J. 2003. Bacterial endophytes in processing carrots (Daucus carota var. sativus): their localization, population density, biodiversity and their effects on plant growth. PLant Soil. 253: 381–390, 2003
  38. Tamosiune, I., Baniulis, D. and Stanys, V. 2017. Role of endophytic bacteria in stress tolerance of agricultural plants: Diversity of microorganisms and molecular mechanisms. In: Kumar V, Kumar M, Sharma S, Prasad R (Eds). Probiotics in Agroecosystem. Springer, Singapore pp 26-42.
  39. Vendan, R.T., Yu, Y.J., Lee, S.H. and Rhee, Y.H. 2010. Diversity of endophytic bacteria in ginseng and their potential for plant growth promotion. Journal of Microbiology. 48:559–565.
  40. Whitelaw, M.A. 2000. Growth promotion of plants inoculated with phosphate solubilizing fungi. Advances in Agronomy. 69: 99-151.
  41. Yang, C., Zhang, X. and Shi, G. 2011. Isolation and identification of endophytic bacterium W4 against tomato Botrytis cinerea and antagonistic activity stability. African Journal of Microbiology Research. 5(2):131-136.
  42. Yasari, E., Patwardhan, A.M., Ghole, V.S., Ghasemi Chapi, O. and Asgarzadeh, A. 2007. Biofertilizers impact on canola (Brassica napus) seed yield and quality. Asian Journal of Microbiology, Biotechnology & Environmental Sciences. 9(3): 701-707.
زیست شناسی خاک
دوره 9، شماره 1
مرداد 1400
صفحه 85-98

فایل ها

هم رسانی

ارجاع به این مقاله

آمار